Једна од главних предности ћелијске културе је способност манипулисања физичком хемијом ћелијске репродукције (тј. температура, пХ, осмотски притисак, тензија О2 и ЦО2) и физиолошким окружењем (тј. концентрација хормона и хранљивих материја).Поред температуре, окружење културе контролише и медијум за раст.
Иако физиолошко окружење културе није тако јасно као њено физичко и хемијско окружење, боље разумевање компоненти серума, идентификација фактора раста потребних за пролиферацију и боље разумевање микроокружења ћелија у култури.(тј. интеракција ћелија-ћелија, дифузија гаса, интеракција са матриксом) сада омогућава да се одређене ћелијске линије узгајају у медијуму без серума.
1.Културно окружење утиче на раст ћелија
Имајте на уму да су услови културе ћелија различити за сваки тип ћелије.
Последице одступања од услова културе потребних за одређени тип ћелије крећу се од експресије абнормалних фенотипова до потпуног неуспеха ћелијске културе.Због тога препоручујемо да се упознате са ћелијском линијом која вас занима и да стриктно пратите упутства дата за сваки производ који користите у експерименту.
2. Мере предострожности за стварање оптимизованог окружења ћелијске културе за ваше ћелије:
Медиј за културу и серум (погледајте доле за више информација)
пХ и ниво ЦО2 (погледајте доле за више информација)
Негујте пластику (погледајте доле за више информација)
Температура (погледајте доле за више информација)
2.1 Културни медији и серум
Подлога за културу је најважнији део средине културе, јер обезбеђује хранљиве материје, факторе раста и хормоне потребне за раст ћелија и регулише пХ и осмотски притисак културе.
Иако су почетни експерименти са ћелијском културом изведени коришћењем природних медија добијених од екстраката ткива и телесних течности, потреба за стандардизацијом, квалитетом медија и повећаном потражњом довели су до развоја дефинитивних медија.Три основна типа медија су базални медијуми, медијуми са редукованим серумом и медијуми без серума и имају различите захтеве за суплементацију серума.
2.1.1 Основни медиј
Гибцо медијум за културу ћелија
Већина ћелијских линија добро расте у основним медијумима који садрже аминокиселине, витамине, неорганске соли и изворе угљеника (као што је глукоза), али ове основне формулације медија морају бити допуњене серумом.
2.1.2 Редукована серумска средина
Боца са Гибцо Лов Серум Медиум
Друга стратегија за смањење штетних ефеката серума у експериментима са ћелијском културом је употреба медијума са редукованим серумом.Редуковани серумски медијум је основна формула медијума богата хранљивим материјама и факторима животињског порекла, који могу смањити потребну количину серума.
2.1.3 Медијум без серума
Боца са Гибцо медијумом без серума
Медијум без серума (СФМ) заобилази употребу животињског серума заменом серума одговарајућом исхраном и хормонским формулацијама.Многе примарне културе и ћелијске линије имају формулације медијума без серума, укључујући линију за производњу рекомбинантног протеина јајника кинеског хрчка (ЦХО), различите ћелијске линије хибридома, линије инсеката Сф9 и Сф21 (Сподоптера фругиперда), као и за домаћина за производњу вируса (на пример, 293, ВЕРО, МДЦК, МДБК) итд. Једна од главних предности коришћења медијума без серума је могућност да се медијум учини селективним за специфичне типове ћелија одабиром одговарајуће комбинације фактора раста.Следећа табела наводи предности и недостатке медија без серума.
Предност
Повећајте јасноћу
Конзистентнији учинак
Лакше пречишћавање и даље обрада
Прецизно процените функцију ћелије
Повећајте продуктивност
Боља контрола физиолошких реакција
Побољшана детекција ћелијских медија
Недостатак
Захтеви за формулу медијума специфичне за тип ћелије
Потребна је већа чистоћа реагенса
Успоравање раста
2.2.1 пХ ниво
Већина нормалних ћелијских линија сисара добро расте на пХ 7,4, а разлике између различитих ћелијских линија су мале.Међутим, показало се да неке трансформисане ћелијске линије боље расту у благо киселој средини (пХ 7,0 – 7,4), док неке нормалне ћелијске линије фибробласта преферирају благо алкалну средину (пХ 7,4 – 7,7).Ћелијске линије инсеката као што су Сф9 и Сф21 најбоље расту на пХ 6,2.
2.2.2 Ниво ЦО2
Медијум за раст контролише пХ културе и пуферује ћелије у култури да се одупру променама пХ.Обично се ово пуферовање постиже садржавањем органских (на пример, ХЕПЕС) или пуфера на бази ЦО2-бикарбоната.Пошто пХ медијума зависи од деликатне равнотеже раствореног угљен-диоксида (ЦО2) и бикарбоната (ХЦО3-), промене атмосферског ЦО2 ће променити пХ медијума.Стога, када се користи подлога пуферована пуфером на бази ЦО2-бикарбоната, неопходно је користити егзогени ЦО2, посебно када се култивишу ћелије у отвореним посудама за културу или култивишу трансформисане ћелијске линије у високим концентрацијама.Иако већина истраживача обично користи 5-7% ЦО2 у ваздуху, већина експеримената са ћелијском културом обично користи 4-10% ЦО2.Међутим, сваки медијум има препоручену тензију ЦО2 и концентрацију бикарбоната да би се постигао тачан пХ и осмотски притисак;за више информација погледајте упутства произвођача медија.
2.3 Гајење пластике
Пластика за ћелијске културе је доступна у различитим облицима, величинама и површинама како би одговарала различитим применама у култури ћелија.Користите водич за пластичну површину за ћелијску културу и водич за контејнере за ћелијску културу у наставку да бисте лакше одабрали праву пластику за вашу примену у култури ћелија.
Погледајте сву Тхермо Сциентифиц Нунц пластику за културу ћелија (линк за оглашавање)
2.4 Температура
Оптимална температура за ћелијску културу у великој мери зависи од телесне температуре домаћина од којег су ћелије изоловане, а у мањој мери од анатомских промена температуре (на пример, температура коже може бити нижа од температуре скелетних мишића ).За ћелијску културу, прегревање је озбиљнији проблем од прегревања.Због тога је температура у инкубатору обично подешена нешто испод оптималне температуре.
2.4.1 Оптимална температура за различите ћелијске линије
Већина ћелијских линија људи и сисара се чува на 36°Ц до 37°Ц ради оптималног раста.
Ћелије инсеката се култивишу на 27°Ц ради оптималног раста;спорије расту на нижим температурама и температурама између 27°Ц и 30°Ц.Изнад 30°Ц, виталност ћелија инсеката се смањује, чак и ако се врати на 27°Ц, ћелије се неће опоравити.
Птичијим ћелијским линијама је потребно 38,5°Ц да би достигле максималан раст.Иако се ове ћелије могу држати на 37°Ц, оне ће расти спорије.
Ћелијске линије које потичу од хладнокрвних животиња (као што су водоземци, хладноводне рибе) могу толерисати широк температурни опсег од 15°Ц до 26°Ц.
Време поста: 01.02.2023