Контаминација ћелијских култура лако може постати најчешћи проблем у лабораторијама ћелијских култура, понекад изазивајући веома озбиљне последице.Загађивачи ћелијске културе се могу поделити у две категорије, хемијски загађивачи као што су медијум, нечистоће у серуму и води, ендотоксини, пластификатори и детерџенти, и биолошки загађивачи као што су бактерије, плесни, квасци, вируси, микоплазма унакрсне инфекције.Контаминиран другим ћелијским линијама.Иако је немогуће потпуно елиминисати контаминацију, њена учесталост и озбиљност се могу смањити темељним разумевањем њеног извора и придржавањем добрих асептичких техника
1. Овај одељак описује главне врсте биолошке контаминације:
Бактеријска контаминација
Контаминација плесни и вирусима
Контаминација микоплазмом
Контаминација квасцем
1.1 Бактеријска контаминација
Бактерије су велика група свеприсутних једноћелијских микроорганизама.Обично су пречника само неколико микрона и могу бити у различитим облицима, од сфера до шипки и спирала.Због своје свеприсутности, величине и брзог раста, бактерије, заједно са квасцима и плесни, су најчешћи биолошки загађивачи у ћелијској култури.
1.1.1 Детекција бактеријске контаминације
Бактеријска контаминација се лако открива визуелном инспекцијом културе у року од неколико дана од инфицирања;
Заражене културе обично изгледају замућене (тј. замућене), понекад са танким филмом на површини.
Такође се често сусрећу нагли пад пХ вредности медијума за културу.
Под микроскопом мале снаге, бактерије се појављују као мале, покретне грануле између ћелија, а посматрање под микроскопом велике снаге може да разреши облике појединачних бактерија.
1.2 Контаминација плесни и вирусима
1.2.1 Контаминација плесни
Плесни су еукариотски микроорганизми из царства гљива који расту у облику вишећелијских филамената званих хифе.Везивне мреже ових вишећелијских филамената садрже генетски идентична језгра која се називају колоније или мицелијум.
Слично контаминацији квасцем, пХ културе остаје стабилан током почетне фазе контаминације, а затим се брзо повећава како култура постаје озбиљнија инфицирана и постаје мутна.Под микроскопом, мицелијум је обично филаментан, понекад у виду густих накупина спора.Споре многих плесни могу да преживе у изузетно тешким и негостољубивим окружењима током фазе мировања и активирају се само када се нађу прави услови раста.
1.2.2 Контаминација вирусом
Вируси су микроскопски инфективни агенси који преузимају машинерију ћелије домаћина за репродукцију.Њихова изузетно мала величина отежава њихово откривање у култури и уклањање из реагенаса који се користе у лабораторијама ћелијске културе.Пошто већина вируса има веома строге захтеве за своје домаћине, они обично не утичу негативно на ћелијске културе других врста осим домаћина.
Међутим, употреба ћелијских култура инфицираних вирусом може представљати озбиљан ризик по здравље лабораторијског особља, посебно ако се људске ћелије или ћелије примата узгајају у лабораторији.
Вирусна инфекција у ћелијским културама може се открити електронском микроскопијом, имунолошким бојењем сетом антитела, ЕЛИСА-ом или ПЦР-ом са одговарајућим вирусним прајмерима.
1.3 Контаминација микоплазмом
Микоплазме су једноставне бактерије без ћелијских зидова, и сматра се да су најмањи организми који се самореплицирају.Због њихове изузетно мале величине (обично мање од 1 микрона), микоплазму је тешко открити све док не достигну изузетно велику густину и проузрокују пропадање ћелијских култура;До тада обично нема очигледних знакова инфекције.
1.3.1 Детекција контаминације микоплазмом
Неке спорорастуће микоплазме могу опстати у културама без изазивања ћелијске смрти, али оне мењају понашање и метаболизам ћелија домаћина у културама.
Хронична инфекција микоплазмама може се окарактерисати смањеном стопом пролиферације ћелија, смањеном густином засићења и аглутинацијом у култури суспензије.
Међутим, једини поуздан начин да се открије контаминација микоплазмом је да се култура редовно тестира коришћењем флуоресцентног бојења (нпр. Хоецхст 33258), ЕЛИСА, ПЦР, имунолошког бојења, ауторадиографије или микробног тестирања.
1.4 Контаминација квасцем
Квасци су једноћелијски еукариоти из царства гљива, величине од неколико микрона (обично) до 40 микрона (ретко).
1.4.1 Детекција контаминације квасцем
Као и код бактеријске контаминације, културе контаминиране квасцем могу постати мутне, посебно ако је контаминација у поодмаклој фази.пХ култура контаминираних квасцем се веома мало мења све док контаминација не постане тежа, у којој фази се пХ обично повећава.Под микроскопом, квасац се појављује као појединачне јајолике или сферне честице и може произвести мање честице.
2.Унакрсна инфекција
Иако није тако честа као микробна контаминација, екстензивна унакрсна контаминација многих ћелијских линија са ХеЛа и другим брзорастућим ћелијским линијама је јасно дефинисан проблем са озбиљним последицама.Набавите ћелијске линије од реномираних ћелијских банака, редовно проверавајте карактеристике ћелијских линија и користите добре асептичке технике.Ове праксе ће вам помоћи да избегнете унакрсну контаминацију.ДНК отисци прстију, кариотипизација и изотипизација могу потврдити да ли постоји унакрсна контаминација у вашој ћелијској култури.
Иако није тако честа као микробна контаминација, екстензивна унакрсна контаминација многих ћелијских линија са ХеЛа и другим брзорастућим ћелијским линијама је јасно дефинисан проблем са озбиљним последицама.Набавите ћелијске линије од реномираних ћелијских банака, редовно проверавајте карактеристике ћелијских линија и користите добре асептичке технике.Ове праксе ће вам помоћи да избегнете унакрсну контаминацију.ДНК отисци прстију, кариотипизација и изотипизација могу потврдити да ли постоји унакрсна контаминација у вашој ћелијској култури.
Време поста: 01.02.2023